服务优势

最终交付

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交付识别所有“独立抗体对”的表位鉴定报告

可添加到定制单克隆抗体开发服务当中

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可针对蛋白质抗原生成的抗体进行检验

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可同时对多达5个mAb进行检验

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可在5个mAb的不同组之间检验

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• 为什么要做表位鉴定？

  在抗体发现中，根据表位的对单抗进行分类：

  • 每个表位对应不同的作用机制，确保了相同组内的单克隆抗体具备相同的功能。因此，在鉴定出一个抗原上的不同表位以后，可以同时激活多种作用机制，从而提高最终效果。
  • 通过剔除针对无功能克隆的相同表位的单抗，研究人员就可以轻松减少先导化合物潜在候选品的数量。
  • 重要的是要确定哪种表位的作用最强，而不是按照通常的偏见选择亲和力最高或最常见表位的单抗。此项分析需要比较不同组内单克隆抗体的效力，从而确保选择功能最强的单抗表位对进行进一步分析。
• 纯化抗体（直接ELISA测定）
  • 使用蛋白质抗原对ELISA孔板进行包被。
  • 在开展生物素标记检验之前，将竞争性抗体添加到孔板内并完成结合
  • 未结合抗体将被洗脱清除，此时孔板上仅剩下已结合的抗体。
  • 将HRP标记的链霉亲和素添加到孔板内，以便通过分光光度法观察结合的检验抗体量。

  
• 上清液（间接ELISA方案）
  • 在ELISA孔板上包被指定的蛋白质抗原。
  • 使用生物素结合的二抗对检验抗体进行预培养。
  • 将竞争抗体加入板中，使其先于检验抗体（使用标记二抗）结合。
  • 所有未结合抗体将被洗去。
  • 将HRP标记的链霉亲和素添加到孔板内，以便通过Octet RED 96的分光光度法观察结合的检验抗体量。

  
• 表位鉴定报告示例

  k8凯发对客户自选的纯化单克隆抗体开展表位鉴定后，您将收到一份表位鉴定报告，其中解释了哪些纯化单抗归入哪个表位组内。报告示例如下所示。所有生物素标记单抗都将显示在表头处，而竞争性单抗将在表格左侧标示。对每种检验抗体与竞争性抗体之间的竞争情况做出评价的直接ELISA测定的结果显示在表格的对应单元格内。此项鉴定仅测量结合生物素标记的检验抗体，较低的结合百分比数值表明，当存在竞争性单克隆抗体时，检验的单克隆抗体无法结合，说明两者都结合到相同的抗原上，因此在同一组内。

  结合百分比	单克隆抗体I-生物素	单克隆抗体II-生物素	单克隆抗体III-生物素	单克隆抗体IV-生物素
  无竞争性抗体	100	100	100	100
  单克隆抗体I竞争	10.3	8.8	18.6	142.7
  单克隆抗体II竞争	7.6	7.7	8.6	134.8
  单克隆抗体III竞争	10.1	9.2	11.2	132
  单克隆抗体IV竞争	93.2	106.2	108	19.8

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